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現貨人血管內皮生長因子ELISA 檢測試劑盒
更新時間:2013-12-11   點擊次數:1430次

本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

 

試驗原理:

VEGF試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知VEGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將VEGF和生物素標記的抗體同時溫育。人血管內皮生長因子ELISA 檢測試劑盒洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中VEGF的濃度呈比例關系。

自備材料

1. 蒸餾水。

2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

 

人血管內皮生長因子ELISA 檢測試劑盒安全性

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項

1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準備

標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

1. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

局限

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

 

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的VEGF標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的VEGF含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

 

3、檢測值范圍:0-40ng/ml

 

4、敏感度: 0.1 ng/ml

人血管內皮生長因子ELISA 檢測試劑盒beta-Amyloid(35-42)  β淀粉樣肽/Aβ42抗體 X47455  0.1ml
ER α  雌激素受體α抗體 X47456  0.1ml
CKLFSF2/CMTM2  趨化素樣因子超家族成員2抗體 X47457  0.2ml
COX7A2  細胞色素c氧化酶VIIA亞型2抗體 X47458  0.1ml
CKLFSF2 isoform 1  趨化素樣因子超家族成員2亞型1抗體 X47459  0.2ml
MAP65/ASE 1  擬南芥MAP65蛋白抗體 X47460  0.2ml
Streptavidin/SA protein  鏈酶親和素抗體 X47461  0.1ml
human Serum IgA  人血清型免疫球蛋白A抗體 X47462  0.2ml
ETFA  電子轉移黃素蛋白α抗體 X47463  0.2ml
γ-taxilin/LSR5  脂多糖相關反應蛋白5抗體 X47464  0.2ml
T4/L-Thyroxine  甲狀腺素T4抗體 X47465  0.2ml
HLA G(N-Terminus)  人類白細胞抗原G抗體(N端) X47466  0.1ml
HLA G(C-terminal)  人類白細胞抗原G抗體(C端) X47467  0.1ml
hemagglutinin protein/H  麻疹病毒血凝素抗體 X47468  0.2ml
WIG-1/PAG608  野生型P53誘導基因1抗體 X47469  0.1ml
CD71/TFR/Transferrin receptor  轉鐵蛋白受體抗體 X47470  0.1ml
GAPDH(3E12)-Loading Control  3-磷酸醛脫氫酶單克隆抗體(內參抗體) X47471  0.1ml
GAPDH   3-磷酸醛脫氫酶抗體(內參抗體) X47472  0.1ml
beta-Actin (Loading Control)  β-肌動蛋白抗體(內參抗體) X47473  0.1ml
14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon)  14-3-3蛋白抗體 X47474  0.1ml
phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 X47475  0.1ml

 

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