梅毒螺旋體抗體檢測作為輸血安全的必測指標，其試驗方法與試劑的選擇尤為重要，ELISA法篩檢梅毒抗體是目前普遍采用的方法，有關梅毒抗體ELISA試劑盒的評價報道較多，但多為靈敏度或特異度等少數評價指標 ［1，2］ 為了全面客觀地評價ELISA方法對無償獻血者梅毒抗體的篩檢價值，ELISA試劑盒篩檢的真實性和可靠性，筆者對我們常用的兩種篩檢試劑盒的檢測真實性、可靠性及Cut-off值的合理性進行評價，現報告如下。
1 材料與方法
1.1 材料 梅毒抗體血清盤血清40份（購自衛生部臨床檢驗中心，批號:200103，其中陽性22份，陰性18份），另外隨機抽取西安市有代表性的無償獻血者梅毒抗體陰性血清100人份。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒分別由上海伊麗薩生物科技有限公司（以下稱ELISA1）和美國諾泰公司（以下稱ELISA2）提供。
1.2 方法
1.2.1 抽樣方法
將2003年1～5月西安市某血液中心無償獻血者梅毒抗體陰性血清標本按順序、年齡、職業、文化程度分層，再按隨機表中隨機數字抽樣，分層特征比例按該血液中心前3年無償獻血者以上分層特征構成比例進行，抽滿100例為止。
1.2.2 盲法篩檢
由評價監督者對考核血清盤重新編密碼，由2名操作熟練的專業檢驗人員對編碼血清盤用上述2種試劑盒進行盲法檢測，操作嚴格按試劑盒說明書進行，篩檢結果由全自動酶標儀自動打印OD值及陰、陽性結果。為考核試劑盒的可靠性，由2名以上專業檢驗人員在條件*相同的情況下，對考核血清盤40份血清進行第二次盲法篩檢，第二次篩檢前重新編密碼，結果判讀后再打開密碼，核對結果。
1.2.3 金標準的確定
衛生部臨床檢驗中心梅毒抗體血清盤已知陽性與陰性為金標準。
1.2.4 其實性評價
將40份血清盤標本分為梅毒抗體陽性與陰性組，再將篩檢試劑盒的篩檢結果分為梅毒抗體陽性與陰性組，分組數據匯入篩檢與診斷試驗評價四格表，用分式 ［3］ 分別計算出真實性評價的8個指標，即靈敏度、特異度、假陽性率、假陰性率、陽性預告值、陰性預告值、準確度及約登指數。
1.2.5 可靠性評價
將40份血清盤樣本*次與第二次篩檢結果，分別匯入四格表，分別計算出各試劑盒重復試驗的符合率與卡帕值，卡帕值的判定標準按Fleiss提出的3級劃分標準評價，即0.75～1.00為符合很好，0.4～0.74為一般符合，0.01～0.39為缺乏符合 ［3］ 。
1.2.6 Cut-off值評價方法
為了評價兩種試劑盒截斷點或臨界值的合理性，將考核血清盤中18份陰性血清及隨機抽取的西安市無償獻血者梅毒抗體陰性血清100人份測量出的OD值編制頻數分布表，按篩檢試驗正常值范圍確定方法 ［4］ ，分別用統計學界限的正態分布法及百分位數法計算出每種試劑盒的Cut-off值，并與按試劑盒說明書規定計算出的Cut-off值比較，結合陰性、陽性OD值頻數分布特點，分析評價其合理性。
2 結果
2.1 對考核血清篩檢結果 在已知22份陽性中，ELISA1篩檢出21份，ELISA2篩檢出22份，在已知18份陰性標本中，ELISA1與ELISA2均檢出17份。
2.2 真實性評價 利用兩種試劑盒的篩檢結果，計算出評價真實性的8個指標。
2.3 可靠性評價 ELISA1與ELISA2兩次重復檢出的陽性份數相同，重復試驗的符合率均為100%，卡帕值均為1.00。
2.4 Cut-off值的評價
依據ELISA1與ELISA2試劑盒對考核血清盤18份陰性血清及100份西安市無償獻血者梅 毒抗體陰性血清測量的OD值，用統計學界限的正態分布法與百分位數法分別計算其Cut-off值，按兩種ELISA試劑盒說明書規定方法分別計算出zui低Cut-off值，并將3種Cut-off值進行比較。結果發現，按規范的正態分布法與百分位數法計算出的Cut-off值均遠低于試劑盒說明書規定的Cut-offzui小值，但結合140份無償獻血者陽性與陰性OD值實際頻率分布特點分析，試劑盒規定的截斷點是合理的，如果按統計界限計算的Cut-off值判讀，并不能提高試劑盒的靈敏度，反而會使假陽性率升高。
ELISA1及ELISA2的靈敏度分別為95.5%，100.0%，特異度分別為94.4%，94.4%，約登指數分別為0.90，0.94，兩種試劑的重復符合率均為100.0%，兩種試劑的Cut-off值是合理的。
3 討論
評價某項篩檢試驗需要有一個*的客觀性強的金標準，衛生部臨床檢驗中心的梅毒抗體考核血清盤樣本來自獻血人群，陰、陽性界限清楚，含有梅毒抗體多種效價的血清，客觀性強，是*的金標準。對于篩檢試驗的評價不僅要評價靈敏度、特異度，還需評價約登指數等多項綜合性指標及可靠性指標，而且還需要對試劑盒陰性與陽性的截斷點（Cut-off值）的合理性進行評價。
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區楓涇鎮環東一路65弄2號3463室
主營產品：酶聯免疫試劑盒，食品農殘檢測，細胞系，培養基，胎牛血清
©2019 版權所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號：滬ICP備14033764號-3 總訪問量：1272233 站點地圖 技術支持：環保在線 管理登陸